肉的宰后嫩化主要是归因于肌原氯纶组成部分的毁掉，肌原氯纶组成部分是由内源性血清质淀粉水解体现酶挥发肌原氯纶和体组织骨架血清质致使的。与二十多年来老是是点赞聚焦点的钙血清质酶不同的，胱天血清质酶（caspases）最近几天当上感求知欲话题。胱天血清质酶在体组织凋亡的执行程序的时候起着至关为重要的效率，表中caspase-3在死去血清质淀粉水解体现中的效率是多多面和多样化的，这样值得买全面一个脚印调查分析。S-亚硝基化在调低钙挥发释放、消耗的能量分解、血清质质挥发和体组织凋亡来调低色泽，是指嫩度和持水效率。刚开始调查分析察觉到S-亚硝基化就可以调低依赖性线粒体的caspase-3级联体现，这有可能是胸肌体组织凋亡和鸡肉的质量变换的情况。caspase-3的调查分析特别是其与体组织凋亡的关联，不过，都不有调查分析探究S-亚硝基化调低caspase-3的共识机制。

2024年9月由广州农耕大学时张万刚专家教授的团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物制品为该研究提供了亚硝基化修饰语组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文版主题词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年反应系数：5.7

发布事件：2024年9月

潜在客户厂家：南京农业大学

理论研究资料：蛋白

拜谱提供数据系统：亚硝基化修饰组学

的技术路线地图：

一、探究最后

01.Caspase-3抗逆性

现阶段尚不很清楚NO对caspase-3的控设计制的功效会不会归因于NO介导的S-亚硝基化，有所不同酸度梯度方向的GSNO成为外源性NO销售，以诱骗caspase-3的身体之外S-亚硝基化。数据揭示，与并没有GSNO的组相较于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活力正相关减少（图1），与此前新闻报道完全一致。GSNO工作减少caspase-3活力的内在缘故仍仍待表明。

图1 有差异溶液浓度的GSNO工作对caspase-3活力的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化程度较

探讨Caspase-3的亚硝基化限度，以揭示GSNO对Caspase-3的发应性。经GSNO解决后，加测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化屈服强度延长（图2）。这部分成果显示，外源性GSNO培养计划可好引诱caspase-3的身体外S-亚硝基化。更让人特别的是，在沒有GSNO都存在的比较组中加测到一家很弱的S-亚硝基化带，这显示caspase-3有可能的发生内源性的S-亚硝基化。因此，本探讨中caspase-3的S-亚硝基化限度较高，而caspase-3的几丁质酶有效降低，这与已经的探讨不一。所以，caspase-3的活性聊天S-亚硝基化遮盖位点尚不明了，还须得加大力度一个脚印的探求。

图2 GSNO补救对caspase-3S-亚硝基化关卡的应响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化装饰组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码回文序列。颜色图标的编码回文序列透露S-亚硝基化肽，黄色图标的C透露S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结血清

结球球血清最为种决定性的体受损细胞骨架球球血清，在持续性肌体受损细胞构成的构成全面性和拉伸性方便起着决定性效用，实验S-亚硝基化caspase-3对结球球血清光吸附的明感性的兼有着决定性功用。与Std（未用胱天球球血清酶-3和GSNO孵育的初使肌钎维素球球血清）组好于，0 μM GSNO组（肌原钎维素和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结球球血清的含氧量相关性降底，提示信息caspase-3对结球球血清兼有着不确定性的球球血清水解反应特性。在GSNO孵育后，全面结球球血清的的含氧量比较明显提升（P < 0.05）。除此之外，当GSNO盐浓度增大时，全面结球球血清的的含氧量持续性调整（P < 0.05）（图5）。此种会发现是因为，SNO呈现的caspase-3以水准依赖关系的途径能够抑制结球球血清的光吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3生物降解结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3生物降解肌钙核蛋白-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶自动自动调节负责管理背部肌肉内缩的细细的的一定要肌原合成合成纤维素淀粉酶。TnT的溶解表现是检验到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化水平下，caspase-3对TnT的溶解情况下如下图6图甲中，与Std组（不含有caspase-3和GSNO的肌原合成合成纤维素）相比之下，caspase-3组中30 kDa TnT精彩场面描写不错提高，意味着caspase-3参于了TnT的溶解，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育引发30 kDa TnT的较低。在100和200 μM GSNO组之間找不到检验到分明的差异性(P > 0.05)，而当GSNO的溶度满足400 μM 时，该精彩场面描写不错减低(P < 0.05)。这部分出现 意味着了SNO绘制的caspase-3对TnT溶解的减弱干扰。结淀粉酶和TnT是caspase-3的过敏底物，而GSNO操作较低caspase-3的灵催化活性应该引发肌原合成合成纤维素淀粉酶溶解业务能力较低。总而言之指出，NO帮助的S-亚硝基化应该用绘制半胱氨酸残基来自动自动调节caspase-3的灵催化活性，随之进几步干扰其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶水解反应业务能力，而干扰羊肉品控。

图6. S-亚硝基化caspase- 3降解塑料肌钙蛋白酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结

本实验最终得以探析S-亚硝基化对caspase-3掩盖的作用下列不属于继而对鸡肉肌原仟维身体之外分解的作用。核蛋白酶质S-亚硝基化可以掩盖caspase-3的半胱氨酸残基，最终得以产生caspase-3渗透性影响，进三步抑止了其对鸡肉肌原仟维核蛋白酶质的核蛋白酶质水解反应学习能力。

三、拜谱个人心得体会

分析分折通过了酶活测定法，亚硝基化表达语组学分折，WB等测量途径，看见蛋清S-亚硝基化可以表达语caspase-3的半胱氨酸残基，这造成 了caspase-3灵活性的消减，并举几步抑止了其对羊肉肌原仟维蛋清的蛋清淀粉水解工作能力。本分析分折为表示蛋清质亚硝基化对肉肥的房产调控体系给予了一大个新的感觉。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的膳食纤维质组学、突显膳食纤维质组学、产生组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸编物料，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total被氧化保存、徘徊巯基，欢迎大家咨询！

参照期刊论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663